Почавши роботу над картиною, і не закінчивши її, Леонардо повернувся до неї до кінця життя. Згідно Гиоргио Вазарі, після повернення в рідне місто, він отримав замовлення на живопис вівтаря для церкви Сантиссіма Annunziata у Флоренції.
Працюючи в монастирі, при церкві, він спочатку виконав предаврительний малюнок. Є документи, що малюнок демонструвався протягом двох днів і викликав захоплення. Перед нами сцена повна рухи: Марія – на колінах у своєї матері, Св. Анни. Однорічна дитина виривається з рук матері. Він відвернувся від неї, граючи з ягням.
Майже вставши з колін Св. Ганни, Марія намагається відтягнути дитини. Можливо, Ганна представляє Церкву, яка не хоче, щоб що-небудь стояло на шляху Пристрасті Христа. Є деякі елементи, схожі з “Картоном Берлингтонского будинку”. Особливо дивує, що в особах Марії та її матері не відчувається великої різниці у віці, як на картинах інших художників.
Крім того, здається, що фігури жінок зливаються в одну, навіть дитина – частина її. Все це підкреслює близьку спорідненість між Анною, Марією і Христом, але розташування кожного – вказує на його роль у цій родині. Крім багатства рухів, живопис вражає величезним пейзажем, що займає третину картини, цим характерні роботи Леонардо да Вінчі. Високі гори і долини, навіть низини, підносяться над групою. Природа-вона головна! Пейзаж можна також тлумачити, як символіку: безплідна, випалена сонцем земля, яскраве світло, можуть читатися, як символ Марії, яка просить за дитину.